Лимфоциты — это клетки лейкоцитарного звена крови, выполняющие ряд важнейших функций. Снижение или повышение уровня данных клеток может говорить о развитии патологического процесса в организме.

Процесс образования и функции лимфоцитов

Лимфоциты вырабатываются в костном мозге, после мигрируют в вилочковую железу (тимус), где под воздействием гормонов и эпителиальных клеток они претерпевают изменения и дифференцируются на подгруппы с различными функциям. В организме человека имеются и вторичные лимфоидные органы, к ним относятся лимфатические узлы, селезенка. Селезенка также является местом гибели лимфоцитов.

Различают Т и В лимфоциты. 10-15% всех лимфоцитов в лимфатических узлах трансформируется в В-лимфоциты. Благодаря именно этим клеткам организм человека приобретает пожизненный иммунитет к перенесенным заболеваниям — при первом контакте с чужеродным агентом (вирус, бактерия, химическое соединение) В-лимфоциты вырабатывают антитела к нему, запоминают болезнетворный элемент и при повторном взаимодействии мобилизуют иммунитет на его уничтожение. Также за счет наличия В-лимфоцитов в плазме крови достигается эффект от вакцинации.

В вилочковой железе около 80% лимфоцитов преобразуются в Т-лимфоциты (CD3 — общий маркер клеток). Рецепторы Т-лимфоцитов выявляют и связывают антигены. Т-клетки, в свою очередь, подразделяются на три подвида: Т-киллеры, Т-хелперы, Т-супрессоры. Каждый из видов Т-лимфоцитов принимает непосредственное участие в устранении чужеродного агента.

Т-киллеры уничтожают и расщепляют клетки, пораженные бактериями и вирусами, раковые клетки. Т-киллеры являются основным элементом антивирусного иммунитета. Функция Т-хелперов состоит в усилении адаптивного иммунного ответа, такие Т-клетки выделяют специальные вещества, активизирующие реакцию Т-киллеров.

Т-киллеры и Т-хелперы — это эффекторные Т-лимфоциты, функция которых состоит в обеспечении иммунного ответа. Есть также Т-супрессоры — регуляторные Т-лимфоциты, регулирующие активность эффекторных Т-клеток. Контролируя интенсивность иммунного ответа, регуляторные Т-лимфоциты предотвращают уничтожение здоровых клеток организма и предупреждают возникновение аутоиммунных процессов.

Нормальные показатели лимфоцитов

Нормальные значения лимфоцитов различны для каждого возраста - обусловлено это особенностями развития иммунной системы.

С возрастом уменьшается объем вилочковой железы, в которой созревает основная часть лимфоцитов. До 6-и лет в крови преобладают именно лимфоциты, по мере взросления человека ведущими становятся нейтрофилы.

• новорожденные дети — 12-36% от общего числа лейкоцитов;
• 1 месяц жизни — 40-76%;
• в 6 месяцев — 42-74%;
• в 12 месяцев — 38-72%;
• до 6 лет — 26-60%;
• до 12 лет — 24-54%;
• 13-15 лет — 22-50%;
• взрослый человек — 19-37%.

Для определения количества лимфоцитов проводят общий (клинический) анализ крови. С помощью такого исследования можно определить общее количество лимфоцитов в составе крови (данный показатель выражается, как правило, в процентном соотношении). Для получения абсолютных значений при расчете необходимо учитывать общее содержание лейкоцитов.

Детальное определение концентрации лимфоцитов проводят при осуществлении иммунологического исследования. В иммунограмме отражаются показатели В и Т лимфоцитов. Норма Т-лимфоцитов — 50-70%, (50,4±3,14)*0,6-2,5 тыс. Нормальный показатель В-лимфоцитов — 6-20%, 0,1-0,9 тыс. Соотношение между Т-хелперами и Т-супрессорами в норме составляет 1,5-2,0.

Повышение и снижение уровня Т-лимфоцитов

Увеличение Т-лимфоцитов в иммунограмме указывает на гиперактивность иммунной системы и наличие иммунопролиферативных нарушений. Снижение уровня Т-лимфоцитов говорит о недостаточности клеточного иммунитета.

При любом воспалительном процессе уровень Т-лимфоцитов снижен. На степень снижения концентрации Т-клеток оказывает влияние интенсивность воспаления, однако не во всех случаях прослеживается такая закономерность. Если в динамике воспалительного процесса Т-лимфоциты повышены, это является благоприятным признаком. Однако повышенный уровень Т-клеток на фоне выраженной клинической симптоматики, наоборот, является неблагоприятным признаком, который свидетельствует о переходе заболевания в хроническую форму. После полного устранения воспаления уровень Т-лимфоцитов достигает нормальных значений.

Причиной увеличения уровня Т-лимфоцитов могут быть такие нарушения, как:

• лимфолейкоз (острый, хронический);
• синдром Сезари;
• гиперактивность иммунитета.

Т-лимфоциты понижены могут быть при следующих патологиях:

• хронические инфекционные заболевания (ВИЧ, туберкулез, гнойные процессы);
• снижение выработки лимфоцитов;
• генетические нарушения, вызывающие иммунодефицит;
• опухоли лимфоидной ткани (лимфосаркома, лимфогранулематоз);
• почечная и сердечная недостаточность последней стадии;
• разрушение лимфоцитов под воздействием определенных медикаментов (кортикостероидов, цитостатиков) или лучевой терапии;
• Т-клеточная лимфома.

Уровень Т-лимфоцитов необходимо оценивать в комплексе с остальными элементами крови, учитывая при этом симптомы и жалобы пациента. Поэтому интерпретировать результаты исследования крови должен исключительно квалифицированный специалист.

агаммаглобулинемия (agammaglobulinaemia ; а- + гаммаглобулины + греч. haima кровь; син.: гипогаммаглобулинемия, синдром дефицита антител) -- общее название группы болезней, характеризующихся отсутствием или резким снижением уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови;

аутоантигены (ауто- + антигены) -- собственные нормальные антигены организма, а также антигены, возникающие под действием различных биологических и физико-химических факторов, по отношению к которым образуются аутоантитела;

аутоиммунная реакция -- иммунная реакция организма на аутоантигены;

аллергия (allergia ; греч. allos другой, иной + ergon действие) -- состояние измененной реактивности организма в виде повышения его чувствительности к повторным воздействиям каких-либо веществ или к компонентам собственных тканей; в основе аллергии лежит иммунный ответ, протекающий с повреждением тканей;

иммунитет активный иммунитет, возникающий в результате иммунного ответа организма на введение антигена;

Основными клетками, осуществляющими иммунные реакции, являются Т- и В-лимфоциты (и производные последних – плазмоциты), макрофаги, а также ряд взаимодействующих с ними клеток (тучные клетки, эозинофилы и др.).

• Лимфоциты

Популяция лимфоцитов функционально неоднородна. Различают три основных вида лимфоцитов: Т-лимфоциты , В-лимфоциты и так называемые нулевые лимфоциты (0-клетки). Лимфоциты развиваются из недифференцированных лимфоидных костномозговых предшественников и при дифференцировке получают функциональные и морфологические признаки (наличие маркеров, поверхностных рецепторов), выявляемые иммунологическими методами. 0-лимфоциты (нулевые) лишены поверхностных маркеров и рассматриваются как резервная популяция недифференцированных лимфоцитов.

Т-лимфоциты - самая многочисленная популяция лимфоцитов, составляющая 70-90% лимфоцитов крови. Они дифференцируются в вилочковой железе - тимусе (отсюда их название), поступают в кровь и лимфу и заселяют Т-зоны в периферических органах иммунной системы - лимфатических узлах (глубокая часть коркового вещества), селезенке(периартериальные влагалища лимфоидных узелков), в одиночных и множественных фолликулах различных органов, в которых под влиянием антигенов образуются Т-иммуноциты (эффекторные) и Т-клетки памяти. Для Т-лимфоцитов характерно наличие на плазмолемме особых рецепторов, способных специфически распознавать и связывать антигены. Эти рецепторы являются продуктами генов иммунного ответа . Т-лимфоциты обеспечивают клеточный иммунитет, участвуют в регуляции гуморального иммунитета, осуществляют продукцию цитокинов при действии антигенов.

В популяции Т-лимфоцитов различают несколько функциональных групп клеток: цитотоксические лимфоциты (Тц), или Т-киллеры (Тк), Т-хелперы (Тх), Т-супрессоры (Тс). Тк участвуют в реакциях клеточного иммунитета, обеспечивая разрушение (лизис) чужеродных клеток и собственных измененных клеток (например, опухолевых клеток). Рецепторы позволяют им распознавать белки вирусов и опухолевых клеток на их поверхности. При этом активизация Тц (киллеров) происходит под влиянием антигенов гистосовместимости на поверхности чужеродных клеток.

Кроме того, Т-лимфоциты участвуют в регуляции гуморального иммунитета с помощью Тх и Тс. Тх стимулируют дифференцировку В-лимфоцитов, образование из них плазмоцитов и продукцию иммуноглобулинов (Ig). Tx имеют поверхностные рецепторы, которые связываются с белками на плазмолемме В-клеток и макрофагов, стимулируя Тх и макрофаги к пролиферации, продукции интерлейкинов (пептидных гормонов), а В-клетки - к продукции антител.

Таким образом, главной функцией Тх является распознавание чужеродных антигенов (представляемых макрофагами), секреция интерлейкинов, стимулирующих В-лимфоциты и другие клетки для участия в иммунных реакциях.

Снижение в крови числа Тх ведет к ослаблению защитных реакций организма (эти лица более подвержены инфекциям). Отмечено резкое снижение числа Тх у лиц, инфицированных вирусом СПИДа.

Тс способны ингибировать активность Тх, В-лимфоцитов и плазмоцитов. Они участвуют в аллергических реакциях, реакциях гиперчувствительности. Тс подавляют дифференцировку В-лимфоцитов.

Одной из основных функций Т-лимфоцитов является продукция цитокинов , которые оказывают стимулирующее или тормозящее влияние на клетки, участвующие в иммунном ответе (хемотаксические факторы, макрофаги ингибирующий фактор - МИФ, неспецифические цитотоксические вещества и др.).

Натуральные киллеры . Среди лимфоцитов в крови, кроме вышеописанных Тц, выполняющих функцию киллеров, имеются так называемые натуральные киллеры (Нк, NK ), которые также участвуют в клеточном иммунитете. Они образуют первую линию защиты против чужеродных клеток, действуют немедленно, быстро разрушая клетки. Нк в собственном организме разрушают опухолевые клетки и клетки, инфицированные вирусом. Тц образуют вторую линию защиты, так как для их развития из неактивных Т-лимфоцитов требуется время, поэтому они вступают в действие позже Нк. Нк - это большие лимфоциты диаметром 12-15 мкм, имеют дольчатое ядро и азурофильные гранулы (лизосомы) в цитоплазме.

• Развитие т- и в-лимфоцитов

Родоначальником всех клеток иммунной системы является кроветворная стволовая клетка (СКК). СКК локализуются в эмбриональном периоде в желточном мешке, печени, селезенке. В более поздний период эмбриогенеза они появляются в костном мозге и продолжают пролиферировать в постнатальной жизни. Из СКК в костном мозге образуется клетка-предшественник лимфопоэза (лимфоидная мультипотентная родоначальная клетка), которая генерирует два типа клеток: пре-Т-клетки (предшественники Т-клеток) и пре-В-клетки (предшественники В-клеток).

• Дифференцировка т-лимфоцитов

Пре-Т-клетки мигрируют из костного мозга через кровь в центральный орган иммунной системы - вилочковую железу (тимус). Еще в период эмбрионального развития в вилочковой железе создается микроокружение, имеющее значение для дифференцировки Т-лимфоцитов. В формировании микроокружения особая роль отводится ретикулоэпителиальным клеткам этой железы, способным к продукции ряда биологически активных веществ. Мигрирующие в вилочковую железу пре-Т-клетки приобретают способность реагировать на стимулы микроокружения. Пре-Т-клетки в вилочковой железе пролиферируют, трансформируются в Т-лимфоциты, несущие характерные мембранные антигены (CD4+, CD8+). Т-лимфоциты генерируют и «поставляют» в кровообращение и в тимусзависимые зоны периферических лимфоидных органов 3 типа лимфоцитов: Тц, Тх и Тс. Мигрирующие из вилочковой железы «девственные» Т-лимфоциты (виргильные Т-лимфоциты) являются короткоживущими. Специфическое взаимодействие с антигеном в периферических лимфоидных органах служит началом процессов их пролиферации и дифференцировки в зрелые и долгоживущие клетки (Т-эффекторные и Т-клетки памяти), составляющие большую часть рециркулирующих Т-лимфоцитов.

Из вилочковой железы мигрируют не все клетки. Часть Т-лимфоцитов погибает. Существует мнение, что причиной их гибели служит присоединение антигена к антигенспецифическому рецептору. В вилочковой железе нет чужеродных антигенов, поэтому данный механизм может служить для удаления Т-лимфоцитов, способных реагировать с собственными структурами организма, т.е. выполнять функцию защиты от аутоиммунных реакций. Гибель части лимфоцитов является генетически запрограммированной (апоптоз).

Дифференцировочные антигены Т-клеток . В процессе дифференцировки лимфоцитов на их поверхности появляются специфические мембранные молекулы гликопротеидов. Такие молекулы (антигены) можно обнаружить с помощью специфических моноклональных антител. Получены моноклональные антитела, которые реагируют лишь с одним антигеном клеточной мембраны. С помощью набора моноклональных антител можно идентифицировать субпопуляции лимфоцитов. Имеются наборы антител к дифференцировочным антигенам лимфоцитов человека. Антитела составляют относительно немного групп (или «кластеров»), каждая из которых узнает один единственный белок клеточной поверхности. Создана номенклатура дифференцировочных антигенов лейкоцитов человека, выявляемых моноклональными антителами. Эта CD-номенклатура (CD - cluster of differentiation - кластер дифференцировки) базируется на группах моноклональных антител, реагирующих с одними и теми же дифференцировочными антигенами.

Получены многоклональные антитела к ряду дифференцировочных антигенов Т-лимфоцитов человека. При определении общей популяции Т-клеток могут быть использованы моноклональные антитела специфичностей CD (CD2, CD3, CDS, CD6, CD7).

Известны дифференцировочные антигены Т-клеток, которые характерны либо для определенных стадий онтогенеза, либо для различающихся по функциональной активности субпопуляций. Так, CD1 - маркер ранней фазы созревания Т-клеток в вилочковой железе. В процессе дифференцировки тимоцитов на их поверхности экспрессируются одновременно маркеры CD4 и CD8. Однако в последующем маркер CD4 исчезает с части клеток и сохраняется только на субпопуляции, переставшей экспрессировать антиген CD8. Зрелые CD4+ клетки являются Тх. Антиген CD8 экспрессируется примерно на ⅓ периферических Т-клеток, которые созревают из CD4+/CD8+ Т-лимфоцитов. Субпопуляция CD8+ Т-клеток включает цитотоксические и супрессорные Т-лимфоциты. Антитела к гликопротеинам CD4 и CD8 широко используются для того, чтобы различать и разделять Т-клетки соответственно на Тх и Тц.

Кроме дифференцировочных антигенов, известны специфические маркеры Т-лимфоцитов.

Т-клеточные рецепторы для антигенов представляют собой антителоподобные гетеродимеры, состоящие из полипептидных α- и β-цепей. Каждая из цепей имеет длину в 280 аминокислот, большая внеклеточная часть каждой цепи свернута в два Ig-подобных домена: один вариабельный (V) и один константный (С). Антителоподобный гетеродимер кодируется генами, которые собираются из нескольких генных сегментов в процессе развития Т-клеток в вилочковой железе.

Различают антигеннезависимую и антигензависимую дифференцировку и специализацию В- и Т-лимфоцитов.

Антигеннезависимая пролиферация и дифференцировка генетически запрограммированы на образование клеток, способных давать специфический тип иммунного ответа при встрече с конкретным антигеном благодаря появлению на плазмолемме лимфоцитов особых «рецепторов». Она совершается в центральных органах иммунитета (тимус, костный мозг или фабрициева сумка у птиц) под влиянием специфических факторов, вырабатываемых клетками, формирующими микроокружение (ретикулярная строма или ретикулоэпителиальные клетки в тимусе).

Антигензависимая пролиферация и дифференцировка Т- и В-лимфоцитов происходят при встрече с антигенами в периферических лимфоидных органах, при этом образуются эффекторные клетки и клетки памяти (сохраняющие информацию о действовавшем антигене).

Образующиеся Т-лимфоциты составляют пул долгоживущих , рециркулирующих лимфоцитов, а В-лимфоциты - короткоживущих клеток.

66. Хар-ка В-лимфоцитов.

В-лимфоциты являются основными клетками, участвующими в гуморальном иммунитете. У человека они образуются из СКК красного костного мозга, затем поступают в кровь и далее заселяют В-зоны периферических лимфоидных органов - селезенки, лимфатических узлов, лимфоидные фолликулы многих внутренних органов. В крови их содержится 10-30% от всей популяции лимфоцитов.

Для В-лимфоцитов характерно наличие на плазмолемме поверхностных иммуноглобулиновых рецепторов (SIg или MIg) для антигенов. Каждая В-клетка содержит 50000...150000 антигенспецифических молекул SIg. В популяции В-лимфоцитов находятся клетки с различными SIg: большинство (⅔) содержат IgM, меньшее число (⅓) - IgG и около 1-5 % - IgA, IgD, IgE. В плазмолемме В-лимфоцитов имеются также рецепторы для комплемента (С3) и Fc-рецепторы.

При действии антигена В-лимфоциты в периферических лимфоидных органах активизируются, пролиферируют, дифференцируются в плазмоциты, активно синтезирующие антитела различных классов, которые поступают в кровь, лимфу и тканевую жидкость.

Дифференцировка В-лимфоцитов

Предшественники В-клеток (пре-В-клетки) развиваются в дальнейшем у птиц в фабрициевой сумке (bursa), откуда произошло название В-лимфоциты, у человека и млекопитающих - в костном мозге.

Сумка Фабрициуса (bursa Fabricii) - центральный орган иммунопоэза у птиц, где происходит развитие В-лимфоцитов, находится в области клоаки. Для ее микроскопического строения характерно наличие многочисленных складок, покрытых эпителием, в которых расположены лимфоидные узелки, ограниченные мембраной. В узелках содержатся эпителиоциты и лимфоциты на различных стадиях дифференцировки. В период эмбриогенеза в центре фолликула формируется мозговая зона, а на периферии (снаружи от мембраны) - корковая зона, в которую, вероятно, мигрируют лимфоциты из мозговой зоны. В связи с тем что в сумке Фабрициуса у птиц образуются исключительно В-лимфоциты, она является удобным объектом для изучения строения и иммунологических характеристик этого вида лимфоцитов. Для ультрамикроскопического строения В-лимфоцитов характерно наличие в цитоплазме групп рибосом в виде розеток. Эти клетки имеют более крупные ядра и менее плотный хроматин, чем у Т-лимфоцитов, в связи с увеличением содержания эухроматина.

В-лимфоциты отличаются от других типов клеток способностью синтезировать иммуноглобулины. Зрелые В-лимфоциты экспрессируют Ig на клеточной мембране. Такие мембранные иммуноглобулины (MIg) функционируют как антигенспецифические рецепторы.

Пре-В-клетки синтезируют внутриклеточный цитоплазматический IgM, но не имеют поверхностных иммуноглобулиновых рецепторов. Костномозговые виргильные В-лимфоциты имеют IgM-рецепторы на своей поверхности. Зрелые В-лимфоциты несут на своей поверхности иммуноглобулиновые рецепторы различных классов - IgM, IgG и др.

Дифференцированные В-лимфоциты поступают в периферические лимфоидные органы, где при действии антигенов происходят пролиферация и дальнейшая специализация В-лимфоцитов с образованием плазмоцитов и В-клеток памяти (ВП).

В ходе своего развития многие В-клетки переключаются с выработки антител одного класса на выработку антител других классов. Этот процесс называется переключением класса. Все В-клетки начинают свою деятельность по синтезу антител с выработки молекул IgM, которые встраиваются в плазматическую мембрану и служат рецепторами для антигена. Затем, еще до взаимодействия с антигеном, большая часть В-клеток переходит к одновременному синтезу молекул IgM и IgD. Когда виргильная В-клетка переходит от выработки одного лишь мембраносвязанного IgM к одновременному синтезу мембраносвязанных IgM и IgD, переключение происходит, вероятно, благодаря изменению процессинга РНК.

При стимуляции антигеном некоторые из этих клеток активируются и начинают выделять антитела IgM, преобладающие в первичном гуморальном ответе.

Другие стимулированные антигеном клетки переключаются на выработку антител классов IgG, IgE или IgA; В-клетки памяти несут эти антитела на своей поверхности, а активные В-клетки их секретируют. Молекулы IgG, IgE и IgA в совокупности называются антителами вторичных классов, так как они, по-видимому, образуются только после антигенной стимуляции и преобладают во вторичных гуморальных ответах.

При помощи моноклональных антител удалось выявить определенные дифференцировочные антигены, которые еще до появления цитоплазматических µ-цепей позволяют отнести несущий их лимфоцит к В-клеточной линии. Так, антиген CD19 является самым ранним маркером, позволяющим отнести лимфоцит к В-клеточному ряду. Он присутствует на пре-В-клетках в костном мозге, на всех периферических В-клетках.

Антиген, выявляемый моноклональными антителами группы CD20, специфичен для В-лимфоцитов и характеризует более поздние стадии дифференцировки.

На гистологических срезах антиген CD20 выявляется на В-клетках герминативных центров лимфоидных узелков, в корковом веществе лимфатических узлов. В-лимфоциты несут также ряд других (например, CD24, CD37) маркеров.

67. Макрофаги играют важную роль как в естественном, так и в приобретенном иммунитете организма. Участие макрофагов в естественном иммунитете проявляется в их способности к фагоцитозу и в синтезе ряда активных веществ - пищеварительных ферментов, компонентов системы комплемента, фагоцитина, лизоцима, интерферона, эндогенного пирогена и др., являющихся основными факторами естественного иммунитета. Их роль в приобретенном иммунитете заключается в пассивной передаче антигена иммунокомпетентным клеткам (Т- и В-лимфоцитам), в индукции специфического ответа на антигены. Макрофаги также участвуют в обеспечении иммунного гомеостаза путем контроля над размножением клеток, характеризующихся рядом отклонений от нормы (опухолевые клетки).

Для оптимального развития иммунных реакций при действии большинства антигенов необходимо участие макрофагов как в первой индуктивной фазе иммунитета, когда они стимулируют лимфоциты, так и в его конечной фазе (продуктивной), когда они участвуют в выработке антител и разрушении антигена. Антигены, фагоцитированные макрофагами, вызывают более сильный иммунный ответ по сравнению с теми, которые не фагоцитированы ими. Блокада макрофагов введением в организм животных взвеси инертных частиц (например, туши) значительно ослабляет иммунный ответ. Макрофаги способны фагоцитировать как растворимые (например, белки), так и корпускулярные антигены. Корпускулярные антигены вызывают более сильный иммунный ответ.

Некоторые виды антигенов, например пневмококки, содержащие на поверхности углеводный компонент, могут быть фагоцитированы лишь после предварительнойопсонизации . Фагоцитоз значительно облегчается, если антигенные детерминанты чужеродных клеток опсонизированы, т.е. соединены с антителом или комплексом антитела и комплемента. Процесс опсонизации обеспечивается присутствием на мембране макрофага рецепторов, которые связывают часть молекулы антитела (Fc-фрагмент) или часть комплемента (С3). С мембраной макрофага у человека непосредственно могут связываться только антитела класса IgG, когда они находятся в комбинации с соответствующим антигеном. IgM могут связываться с мембраной макрофага в присутствии комплемента. Макрофаги способны «распознавать» растворимые антигены, например гемоглобин.

В механизме распознавания антигена выделяют два этапа, тесно связанных друг с другом. Первый этап заключается в фагоцитозе и переваривании антигена. Во втором этапе в фаголизосомах макрофага накапливаются полипептиды, растворимые антигены (сывороточные альбумины) и корпускулярные бактериальные антигены. В одних и тех же фаголизосомах может быть обнаружено несколько введенных антигенов. Изучение иммуногенности различных субклеточных фракций выявило, что наиболее активное антителообразование вызывает введение в организм лизосом. Антиген обнаруживается также в мембранах клеток. Выделяемая макрофагами большая часть переработанного материала антигенов оказывает стимулирующее влияние на пролиферацию и дифференцировку клонов Т- и В-лимфоцитов. Небольшое количество антигенного материала может длительное время сохраняться в макрофагах в виде химических соединений, состоящих не менее чем из 5 пептидов (возможно, в связи с РНК).

В В-зонах лимфатических узлов и селезенки имеются специализированные макрофаги (дендритные клетки), на поверхности многочисленных отростков которых сохраняются многие антигены, попадающие в организм и передающиеся соответствующим клонам В-лимфоцитов. В Т-зонах лимфатических фолликулов расположены интердигитирующие клетки, влияющие на дифференцировку клонов Т-лимфоцитов.

Таким образом, макрофаги принимают непосредственное активное участие в кооперативном взаимодействии клеток (Т- и В-лимфоцитов) в иммунных реакциях организма.

Клетки, экспрессирующие антиген CD8, представлены основными двумя субпопуляциями - цитотоксическими Т-клетками и Т-лимфоцитами с супрессорной активностью.

Со временем стало известно, что CD8 экспрессируют не только эти субпопуляции лимфоцитов, но и отдельные клоны других клеток: макрофаги, естественные киллеры (ЕК) , тучные клетки, дендритные клетки (ДК) ; основные лиганды CD8 - а2- и а3-домены антигенов I класса главного комплекса гистосовместимости (ГКГ) .

Из этого следует, что CD8 - неспецифический маркер цитотоксических лимфоцитов (ЦТЛ) и Т-супрессорных лимфоцитов, но рассматривается как один из основных фенотипических признаков этих клеток.

Именно поэтому при объективной оценке уровня супрессии Т-лимфоцитов необходимо обязательно изучать супрессорную активность клеток, экспрессируюших CD8, с использованием разработанного для этой цели метода, так как только определение CD8 не дает оснований говорить ни о цитотоксической, ни о супрессорной активности Т-лимфоцитов, имеющих общий маркер CD8.

Общие представления о СD8+СD28-Т-лимфоцитах

Общее представление о супрессорных Т-лимфоцитах начало формироваться уже в 70-х годах прошлого столетия и к середине 80-х годов стало известно, что эти клетки представлены различными клонами, отличающимися условиями возникновения, кинетикой формирования, особенностями действия, разнообразием свойств, секретируемыми медиаторами и др.

Тем не менее уже тогда Б.Д. Брондзом было сформулировано, что они имеют общие особенности, которые состоят в способности блокировать дифференцировку и активность других лимфоидных клеток и это принципиально отличает их от ЦТЛ. К отличиям Т-супрессоров от других Т-лимфоцитов следует также отнести их нестабильность, высокую чувствительность к различным воздействиям, короткий период жизни и др.

Благодаря исследованиям многих известных иммунологов того времени были идентифицированы (с помощью методических возможностей того периода) некоторые поверхностные маркеры этих клеток, установлены их отличия от других клеток, выявлены некоторые этапы и механизмы активации Т-супрессоров.

В результате было сделано заключение, что Т-супрессоры и их различные клоны представляют собой регуляторные клетки, которые и осуществляют контроль соотношения между клеточным и гуморальным иммунитетом и во многом определяют интенсивность ответа к опухолям, трансплантатам, вирусам. К этому следует добавить, что указанное представление не претерпело принципиальных изменений и по настоящее время.

Со временем изучение СD8+Т-лимфоцитов дало возможность установить, что для СD8+Т-лимфоцитов с супрессорной активностью характерно отсутствие экспрессии молекул CD28, поэтому их фенотип был определен как CD8+CD28-.

При исследовании этих клеток в различных системах (особенно часто использовали смешанную культуру лимфоцитов) было показано, что они обладают множеством ингибирующих эффектов: ингибиция пролиферации СD4+Т-лимфоцитов, стимулированных аллогенными клетками, ингибиция рецепторов, связанных преимущественно с активацией клеток (рецепторы IL-2 и трансферина), подавление экспрессии ко-стимулирующих молекул антигенпрезентирующими клетками, что препятствует их оптимальному взаимодействию с СD4+Т-лимфоцитами, неспособность поддерживать секрецию цитокинов и др.

Было подтверждено, что при осуществлении своих ингибиторных влияний СD8+СD28-Т-лимфоциты распознают комплекс антигены I класса ГКГ - пептиды с участием TCR этих клеток. Установлено также, что СD8+СD28-Т-лимфоциты - гетерогенная субпопуляция.

В общей характеристике клеток этого типа важное значение имеет то, что они характеризуются снижением пролиферации в ответ на стимулы, ингибируют цитотоксичность, отличаются высоким уровнем экспрессии CD11b, CD29, CD57, CD94 при низком по сравнению с СD8+СD28+Т-лимфоцитами уровне CD25; у СD8+СD28-Т-лимфоцитов периферической крови существенно снижено фосфорилирование TCR-zeta-цепи и высокий уровень ингибитора циклинзависимой киназы р16.

Получение моноклональных антител, которые строго взаимодействуют с СD8+СD28-Т-лимфоцитами, позволило подтвердить, что они представляют собой самостоятельный клон клеток, отличающийся от цитотоксических лимфоцитов; применение указанных антител обрывало ингибирующие эффекты CD8+CD28-T-лимфоцитов как in vivo, так и in vitro, но не влияло на функции ЦТЛ.

С помощью моноклональных антител в этих клетках был идентифицирован один из эпитопов ганглиозидов - CD75s, который не выявлялся на других клетках, что послужило основанием для расширения фенотипической характеристики, которая была определена как CD8+CD28-CD75s+.

С позиций понимания общебиологического значения CD8+CD28-Т-лимфоцитов важна их способность взаимодействовать с эпителиальными клетками слизистой оболочки. CD8+CD28-T-клетки с такой способностью экспрессируют CD101 и CD103, взаимодействуют с эпителиальными клетками через белок р180 и выполняют регуляторные функции.

Авторы с полным основанием заключают, что в слизистой оболочке есть СD8+СD28-СD101+СD103+Т-лимфоциты, которые осуществляют локальный иммунологический контроль. Из этих данных следует, что регуляторные влияния СD8+СВ28-Т-лимфоцитов не ограничиваются Тh1-лимфоцитами и имеют более широкий спектр действия.

Взаимодействие СD8+СD28-Т-лимфоцитов с эпителиальными клетками представлено на рис. 58.

Рис. 58. Взаимодействие супрессорных Т-лимфоцитов и эпителиальных клеток:
CD101 - гликопротеин, участвующий в ко-стимуляции; CD103 - антиген лимфоцитов слизистой оболочки

Эти общие представления о СD8+СD28-Т-лимфоцитах в последнее время пополняются новыми данными, которые раскрывают как ранее не известные их ингибиторные эффекты, так и некоторые пути и механизмы их реализации. Такие данные получены и в экспериментальных исследованиях, и при изучении супрессорных Т-лимфоцитов периферической крови здоровых лиц, а также при некоторой патологии.

Значительный интерес представляют сведения о том, что упомянутый выше факт гетерогенности этого клона клеток получает новое освещение. При исследовании СD8+СD28-Т-лимфоцитов периферической крови человека были выявлены три их типа, объединенные способностью ингибировать антигенспецифический ответ Т-лимфоцитов.

Первый тип характеризуется способностью повреждать экспрессию ко-стимулирующих молекул на ДК - эффект, который требует непосредственного межклеточного взаимодействия. Второй обладает выраженной способностью ингибировать секрецию таких цитокинов, как IFNy и IL-6, что происходит без обязательного межклеточного контакта. Третий опосредует свои эффекты, секретируя IL-10.

При изучении как экспрессирующих CD28, так и неэкспрессирующих Т-лимфоцитов в периферической крови людей различных возрастных групп были получены важные данные. Во-первых, показано, что с возрастом количество СD8+СD28-Т-лимфоцитов уменьшается, во-вторых, стимуляция фитогемагглютинина (ФГА) увеличивает соотношение этих клонов клеток во всех возрастных группах и усиливает пролиферацию не только CD8+CD28+-, но CD8+CD28-T-клеток при более высоком уровне пролиферации последних у пожилых лиц.

Наконец, было установлено, что обработка лимфоцитов ФГА приводит к апоптозу всех СD8+Т-лимфоцитов и количество погибших клеток было одинаковым в обоих клонах - свидетельство того, что способность к апоптозу не зависела от возраста. К этому следует добавить данные о том, что увеличением количества СD8+СD28-Т-лимфоцитов у пожилых лиц без выявленной патологии можно объяснить снижение пролиферации, сопровождающееся усилением активности циклинзависимой протеинкиназы р16.

Вполне обоснованно полагать, что эти новые данные при дальнейшем изучении возрастных изменений Т-супрессорных лимфоцитов могут оказаться существенными для выяснения их роли в возрастных особенностях регуляции иммунологического гомеостаза.

К настоящему времени стали известны основные этапы ингибирующего действия СD8+СD28-Т-лифоцитами, активация которых может происходить под влиянием аллогенных, ксеногенных, а также гетерогенных антигенпрезентирующих клеток, нагруженных антигенами. Основными участниками реализации ингибирующего действия супрессорных Т-лимфоцитов являются: СD8+СD28+Т-лимфоциты, антигенпрезентирующие клетки и СD4+Т-хелперы.

При этом антигенпрезентируюшие клетки выполняют роль своеобразного мостика между Т-супрессорами и СD4+Т-лимфоцитами. Общий механизм ингибирующего действия супрессорных Т-лимфоцитов можно представить так: активация СD8+СD28-Т-лимфоцитов человека в результате распознавания ими комплекса антигены главного комплекса гистосовместимости - пептид (процесс происходит с участием TCR супрессорных клеток) на антигенпрезентирующих клетках, что лишает их способности экспрессировать ко-стимулирующие молекулы и поэтому после распознавания Т-лимфоцитами-хелперами комплекса антигены II класса ГКГ - пептид они не получают необходимого ко-стимулирующего сигнала, становятся энергичными и не способными к активации и пролиферации. Схематически этот процесс представлен на рис. 59.

Рис. 59. Этапы ингибирующего влияния СD8+СD28~Т-лимфоцитов на СD4+Т-лимфоциты (хелперы): АПК - антигенпрезентирующая клетка

Для понимания механизма действия супрессорных Т-лимфоцитов важно также то, что для осуществления ингибирующего действия они не нуждаются ни в пролиферации, ни в синтезе белка. При реализации ингибирующих сигналов Т-супрессорных лимфоцитов в антигенпрезентирующих клетках ингибируется активность NF-kappaB, что играет главную роль в их неспособности посылать ко-стимулирующие сигналы Th-лимфоцитам.

Как уже отмечено, существенное внимание уделяется вопросу о том, необходим ли для осуществления ингибирующего влияния CD8+CD28-T-лимфоцитами их непосредственный контакт с антигенпрезентирующими клетками. В настоящее время большинство авторов склоняется к тому, что такой межклеточный контакт необходим.

Множество фактов, позволяющих расширить представления о регуляторных возможностях СD8+СD28-Т-лимфоцитов, получены при их изучении в условиях трансплантации ткани, а также аутоиммунной патологии. Согласно полученным данным наличие CD8+CD28-Т-лимфоцитов во многом предопределяет судьбу трансплантата.

Сравнительное изучение этих клеток периферической крови здоровых лиц и людей с трансплантированным сердцем показало значительно более выраженную их активацию у больных, чем у здоровых лиц с параллельной активной экспрессией CD38, лейкоцитарного антигена DR, более высоким содержанием перфоринположительных клеток.

Отмечено, что экспрессия CD27 более выражена на клетках CD8+CD28- больных, у которых не происходило отторжения трансплантата, по сравнению с больными, у которых наблюдались признаки отторжения. В связи с этими данными определяется еще один аспект значения Т-супрессорных клеток: существует клон регуляторных клеток CD8+CD28-CD27+, которые играют роль в защите трансплантата.

Установлено также, что эти клетки, выделенные из трансплантатов, не проявляют цитотоксической активности против клеток донора и имеют более высокий уровень экспрессии KIR94 - факты, свидетельствующие о том, что при трансплантации происходят фенотипические изменения в Т-супрессорных лимфоцитах.

Учитывая, что Т-супрессорные лимфоциты находятся в крови после трансплантации, а также их способность супрессировать экспрессию ко-стимулирующих молекул (CD80, CD86) на антигенпрезентирующих клетках донора, целесообразно проведение соответствующего мониторинга при трансплантации.

Как уже указывалось, изучение СD8+СD28-Т-лимфоцитов при аутоиммунной патологии также дает информацию о свойствах этих клеток. В частности, установлено, что у больных с красной системной волчанкой в активной фазе СD8+СD28-Т-лимфоциты не обладали ингибирующей активностью, что сочеталось с дисбалансом между ингибиторными влияниями IL-6 и стимулирующими IL-12.

Способность Т-супрессорных лимфоцитов подавлять пролиферацию антигенспецифических СD4+Т-лимфоцитов ассоциируется с появлением ремиссии у больных с аутоиммунной патологией. В системах in vitro удалось охарактеризовать предшественников CD8+CD28-T-лимфоцитов и показать, что ключевую роль в их генерации играют моноциты, которые секретируют IL-10 после стимуляции GM-CSF (в этих случаях прямой межклеточный контакт существенной роли не играет).

Предшественники имеют фенотип CD8+CD45RA-CD27-CCR-IL10Ra-. Было также показано, что Т-супрессорные лимфоциты подавляют активность и антигенспецифических цитотоксических лимфоцитов, уменьшая экспрессию антигенов I класса главного комплекса гистосовместимости.

Представленные данные не оставляют сомнений в том, что СD8+СD28-Т-лимфоциты играют важную роль в поддержании иммунологического гомеостаза вместе с СD4+-регуляторными Т-лимфоцитами.

Есть достаточно оснований считать, что одна из основных функций этих клеток - регуляция специфического Т-клеточного ответа. Активация супрессорных Т-лимфоцитов через специфическое распознавание в физиологических условиях защищает Th-лимфоциты от чрезмерной активации, а следовательно, и от чрезмерного иммунологического ответа в определенных условиях, в частности при увеличении количества реактивных Т-хелперов.

Имеющиеся данные показывают, что ингибирующие эффекты Т-супрессорных лимфоцитов являются одними из важных участников индукции периферической толерантности, а дисрегуляция контроля, который осуществляется этими клетками над аутореактивными клонами других Т-лимфоцитов, может быть причиной развития аутоиммунной патологии.

Наряду с этим нельзя не согласиться с тем, что понимание физиологического значения роли СD8+СD28-Т-лимфоцитов требует дальнейшего изучения, которое позволит получить новые данные о механизмах их действия в опухолевой и аутоиммунной патологии.

Общие представления о СD8+СD28-Т-лимфоцитах дает рис. 60.

Рис. 60. Фенотипические и функциональные особенности СD8+СD28-Т-лимфоцитов

Регуляторные функции супрессорных Т-лимфоцитов

Результаты изучения супрессорных СD8+СD28-Т-лимфоцитов не оставляют сомнений в том, что они выполняют важные регуляторные функции, которые достаточно четко определены в условиях нормы.

Вполне обоснованно также утверждать, что как супрессорные Т-лимфоциты (CD8+CD28-), так и регуляторные СD4+СD25+Т-лимфоциты (Th3/Trl) - совместные участники регуляции иммунологического гомеостаза на всех этапах его формирования.

Наряду с этим очевидно и то, что если роль супрессорных Т-лимфоцитов в условиях нормы достаточно ясна, то роль этих клеток при злокачественном росте предстоит выяснить в дальнейшем. В этом плане особый интерес представляет вопрос: при каких условиях CD8+CD28-T-cyпрессоры приобретают способность к цитотоксическому действию - факт, который наблюдался только при их культивировании с опухолевыми клетками.

Детализация этого вопроса (во всех ли случаях возможно появление способности к цитотоксичности, в какой мере это связано с биологическими особенностями опухолевых клеток, каков удельный вес этих клеток в реализации цитотоксичности и каков механизм влияния опухолевых клеток на СD8+СD28-Т-лимфоциты), несомненно, даст возможность нового понимания роли Т-супрессорных лимфоцитов в опухолевом процессе.

Не менее важно и дальнейшее изучение особенностей взаимодействия Т-супрессорных лимфоцитов с эндотелиальными клетками в процессе роста опухоли. Интерес к выяснению этого вопроса понятен в связи с тем, что взаимодействие СD8+СD28-Т-лимфоцитов с эндотелиальными клетками приводит к выраженным проявлениям активности последних, что может влиять на процесс злокачественной трансформации.

Обобщая представленные материалы, можно сделать такие выводы:

Первое

Т-супрессорные лимфоциты - CD8+CD28- представляют собой отдельный клон Т-лимфоцитов, экспрессирующих CD8, обладают выраженными ингибирующими эффектами в отношении СD4+Т-лимфоцитов, способны взаимодействовать с эндотелиальными клетками; выполняют важную роль в поддержании иммунологического гомеостаза в условиях нормы и патологии.

Второе

Ингибирующие эффекты супрессорных Т-лимфоцитов обусловлены межклеточными взаимодействиями, в которых наряду с СD8+СD28-Т-лимфоцитами принимают участие дендритные клетки и СD4+Т-лимфоциты.

Третье

В большинстве случаев при различных онкологических заболеваниях количество СD8+СD28-Т-лимфоцитов в крови увеличивается, что нередко сочетается с плохим прогнозом; лимфоциты, инфильтрирующие опухоль, также содержат значительное количество этих клеток.

Четвертое

При совместном культивировании Т-супрессорных лимфоцитов с аутологичными опухолевыми клетками появляются CD8+СD28-Т-лимфоциты, способные оказывать цитотоксическое действие.

Пятое

Определение количества СD8+СD28-Т-лимфоцитов может использоваться как контроль за влиянием

Фагоцитоз – комплекс клеточных реакций, направленных на распознавание, поглощение и элиминацию из организма корпускулярных частиц размером более 0,5 мкм. Процесс фагоцитоза состоит из следующих стадий: хемотаксис, адгезия, поглощение, киллинг и переваривание объекта.

Тесты I уровня

Стадия поглощения

Поглотительная активность (фагоцитарное число – ФЧ). Метод исследования: микроскопический. Выявляет процент нейтрофилов, способных поглощать корпускулярные антигены (дрожжи, латекс, культура стафилококка). Поглотительная активность нарушается реже, чем другие функции фагоцитирующих клеток. Норма (объект фагоцитоза – дрожжи): 60-90%.

Поглотительная активность снижена – миелопролиферативные заболевания, тяжелые инфекции, сепсис, перитонит/

Стадия переваривания (завершенность фагоцитоза)

Методы исследования : микроскопический, проточная цитометрия. Микроскопический метод основан на подсчете количества живых и мертвых микробных клеток в 100 нейтрофилах и вычислении индекса бактерицидности (ФИ=Ч убитых /Ч живых). Метод проточной цитометрии включает автоматизированную регистрацию количества живых и мертвых микробных клеток до и после их взаимодействия с нейтрофилами. Норма (микроскопический метод): 60-70%.

Переваривающая активность снижена – рецидивирующие бактериальные инфекции; вялотекущие гнойно-воспалительные процессы; длительно не заживающие раны; миелолейкозы, сахарный диабет, уремия, ожоги, полостные опера­ции, иммуносупрессивная терапия.

Бактерицидная активность (киллинг)

Антимикробные факторы нейтрофилов делятся на кислородзависимые и кисло­роднезависимые. Методы исследования кислородзависимых факторов : НСТ-тест, хемилюминесценция.

НСТ-тест спонтанный (тест восстановления нитросинего тетрозолия) основан на способности частиц нитросинего тетразолия, поглощенных нейтрофилом, менять окраску под действием активных форм кислорода. Тест выявляет процент нейтрофилов с активными формами кислорода. Метод исследования : микроскопический. Норма : 4-10%.

НСТ-тест повышен – острые бактериальные инфекции (в начальном периоде), генерализация очаговых воспалительных процессов, туберкулез легких, хронические гепатиты, ревматизм, ревматоидный артрит.

НСТ-тест снижен – хронизация воспалительного процесса, злокачественные новообразования, тяжелые ожоги, травмы, стресс, недостаточность питания, лечение цитостатиками и иммунодепрессантами.

НСТ-тест отрицателен – врожденный дефект фагоцитоза(хроническая гранулематозная болезнь).

НСТ-тест стимулированный (фагоцитарный резерв) отражает потенциальную способность нейтрофилов продуцировать активные формы кислорода в ответ на антигенное раздражение. Норма (фагоцитарный резерв) 2,4-3,5.

Фагоцитарный резерв снижен – гнойно-воспалительные процессы, тяжелые пиогенные инфекции кожи; миелолейкоз, сахарный диабет, уремия, ожоги, полостные операции, иммуносупрессивная терапия.

Иммунодиагностика нарушений клеточного звена иммунитета

Тесты I уровня. Фенотипирование лимфоцитов

Под световым микроскопом все лимфоциты выглядят одинаково, однако их можно отличить по антигенам клеточной поверхности, их обозначают CD-молекулами (СD1, СD2, СDЗ и т.д. до СD130) и выявляют с помощью моноклональных антител. Набор антигенов зависит от типа клеток и их функций. В соответствии с общепринятой в мире СD-кластерной классификацией маркером всех Т-лимфоцитов считают CD3, маркером Т-хелперов CD4, маркером Т-киллеров/цитотоксических CD8 и т.д.

Метод исследования: проточная цитофлуориметрия с использованием меченых флуорохромными красителями моноклональных антител к специфическим поверхностным маркерам этих клеток и последующей автоматической регистрацией.

Численность основных субпопуляций лимфоцитов крови (нормальные значения)

Показатель	0-3 мес.	3-12 мес.	1-2 года	2-6 лет	6-16 лет	16-80 лет
CD3 +	%	55-78	45-79	53-81	62-80	66-76	55-80
abs *10 9 /л	2,07-6,54	2,28-6,45	1,46-5,54	1,61-4,23	1,40-2,00	0,80-2,00
CD3 + CD4 +	%	41-64	36-61	31-54	35-51	33-41	31-49
abs *10 9 /л	1,46-5,12	1,69-4,60	1,02-3,60	0,90-2,86	0,7-1,10	0,6-1,60
CD3 + CD8 +	%	16-35	16-34	16-38	22-38	27-35	12-30
abs *10 9 /л	0,65-2,45	0,72-2,49	0,57-2,23	0,63-1,91	0,60-0,90	0,19-0,65
CD16 + CD56 +	%	2-14	2-13	3-16	4-23	4-27	6-20
abs *10 9 /л	0,04-0,92	0,04-0,92	0,04-0,92	0,10-1,33	0,10-0,50	0,15-0,60
CD19 + (CD20 +)	%	19-31	19-31	19-31	21-28	12-22	5-19
abs *10 9 /л	0,50-1,50	0,50-1,50	0,50-1,50	0,70-1,30	0,30-0,50	0,10-0,50
CD3 + HLADR +	%	1-9	1-7	3-12	3-13	3-10	0-12

Т-лимфоциты (CD3)

Уровень CD3 + повышен – начальный период острого воспалительного процесса, лимфолейкоз, обострение хронического воспалительного процесса.

Уровень CD3 + снижен – первичные и вторичные иммунодефициты с наруше­нием Т-клеточного звена иммунитета; воспалительные заболевания, злокачественные новообразования, состояние после травмы, операции, прием цитостатиков, гормонов, иммунодепрессантов.

Активированные Т-лимфоциты (СD25, НLA-DR)

Активационные маркеры – CD25, НLA-DR. появляются на Т-лимфоцитах, находящихся в стадии активации и могут быть использованы для диагностики, оценки активности иммунопатологических заболеваний, мониторинга лечения.

Уровень CD3 + CD25 + , CD3 + НLA-DR + повышен – активация иммунного ответа: острый или хронический воспалительный процесс, пневмония, ВИЧ-инфекция, аутоиммунные и онкологические заболевания. Показатели снижаются до нормы при благоприятном течении заболевания.

Уровень CD3 + CD25 + , CD3 + НLA-DR + снижен – иммунодефициты с нарушением Т-клеточного звена иммунитета.

Т-хелперы (CD3CD4)

Уровень CD3 + CD4 + повышен – острый инфекционно-воспалительный процесс, обострение аллергических и аутоиммунных заболеваний.

Уровень CD3 + CD4 + снижен – врожденные и приобретенные иммунодефициты, ВИЧ-инфекция, инфекционный мононуклеоз, злокачественные новообразования, длительное лечение цитостатиками, гормонами, иммунодепрессантами.

Т-цитотоксические (Т-киллеры) (CD3CD8)

Уровень CD3 + CD8 + снижен – первичные и вторичные иммунодефициты, прогрессирующие злокачественные новообразования, лучевая терапия, длительное лечение цитостатиками, гомонами, иммунодепрессантами.

Иммунорегуляторный индекс

При некоторых заболеваниях диагностическое и прогностическое значение имеет соотношение CD4/CD8 или иммунологический индекс (ИРИ). Норма : 1,2-2,5.

CD4/CD8 (ИРИ) повышен – аутоиммунные заболевания, острый Т-лимфобластный лейкоз, тимома.

CD4/CD8 (ИРИ) снижен – вирусные инфекции (герпес, корь вирусный гепатит, инфекционный мононуклеоз, ВИЧ/СПИД), хронические заболевания, опухоли, множественная миелома. Величина ИРИ менее 1 косвенно соответствует иммунодефициту.

Натуральные киллеры (НK-клетки, CD16CD56)

НK-клетки – большие гранулярные лимфоциты, лизирующие клетки - мишени, инфицированные вирусами, внутриклеточными возбудителями, а также мутантные и опухолевые клетки, без специфического распознавания, необходимого для Т-киллеров.

Уровень НK-клеток (CD3 +- CD16 + CD56 +) повышен – острый воспалительный процесс, бронхиальная астма, злокачественные новообразования, лейкоз.

НКТ-клетки (CD3CD16CD56)

НKТ-клетки имеют рецепторы, как НK-клеток, так и Т-лимфоцитов. Осуществляют регуляторную функцию, синтезируя цитокины.

Уровень (CD3 + CD16 + CD56 +) повышен – при острых тяжелых воспалительных процессах, онкологических заболеваниях.

Уровень (CD3 + CD16 + CD56 +) снижен – при аутоиммунных заболеваниях.

В-лимфоциты (CD19,CD20)

Уровень СD19 + ,CD20 + снижен – гипо- и агаммаглобулинемии (врожденные и приобретенные); лимфолейкозы, лимфомы не В-клеточного типа; спленэктомия; прием иммунодепрессантов.

Метод определения Иммунофенотипирование (проточная цитофлюориметрия, безотмывочная технология)

Исследуемый материал Цельная кровь (с ЭДТА)

Доступен выезд на дом

В профиль входят следующие показатели:

• Лимфоциты, абсолютное значение,
• Т-лимфоциты (CD3+),
• Т-хелперы (CD3+CD4+),
• Т-цитотоксические лимфоциты (CD3+CD8+),
• Иммунорегуляторный индекс (CD3+CD4+/CD3+CD8+),
• В-лимфоциты (СD19+),
• ЕК-клетки (CD3-CD16+CD56+),
• Т-ЕК-клетки (CD3+CD16+CD56+).

Лимфоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития. Физиологическая роль их может быть различной. Эти структуры являются мишенями при иммунофенотипировании лимфоцитов как антигенные маркёры различных субпопуляций, присутствие которых определяют с помощью меченых моноклональных антител. Поверхностные антигенные структуры на клетках, выявляемые моноклональными антителами, назвали кластерами дифференциации (CD, clusters of differentiation). Кластерам дифференциации в целях стандартизации присвоены определённые номера. Используя флюорохром-меченые моноклональные антитела, связывающиеся с определёнными CD, можно произвести подсчёт содержания лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям. Это позволяет понять природу некоторых заболеваний, оценить состояние пациента, следить за течением и прогнозировать дальнейшее развитие заболевания.

Основные субпопуляции лимфоцитов

Т-лимфоциты - лимфоциты, созревание которых происходит в тимусе (отсюда их название). Они участвуют в обеспечении клеточного иммунного ответа и контролируют работу В-лимфоцитов, ответственных за образование антител, т. е. за гуморальный иммунный ответ.

Т-хелперы (от англ. «to help» – помогать) – разновидность Т-лимфоцитов, несут на своей поверхности структуры, способствующие распознаванию антигенов, презентированных вспомогательными клетками, участвуют в регуляции иммунного ответа, вырабатывая различные цитокины.

Цитотоксические Т-клетки - распознают фрагменты антигена на поверхности клеток-мишеней, ориентируют свои гранулы по направлению к мишени и высвобождают их содержимое в области контакта с ней. При этом некоторые цитокины являются сигналом гибели (по типу апоптоза) для клеток-мишеней.

В-лимфоциты (от лат. «bursa» - сумка, по названию сумки Фабрициуса, в которой созревают эти лимфоциты у птиц) - проходят развитие в лимфоузлах и других периферических органах лимфоидной системы. На поверхности эти клетки несут иммуноглобулины, функционирующие как рецепторы к антигенам. В ответ на взаимодействие с антигеном В-лимфоциты отвечают делением и дифференциацией в плазматические клетки, вырабатывающие антитела, посредством которых обеспечивается гуморальный иммунитет.

ЕК-клетки (естественные киллерные клетки, или натуральные киллеры) – клетки с естественной, неиммунной цитотоксической активностью к неопластически изменённым клеткам-мишеням. ЕК-клетки не относятся ни к зрелым Т- или В-лимфоцитам, ни к моноцитам.

Т-ЕК (ЕКТ)-клетки – это клетки с естественной неиммунной киллерной активностью, имеющие признаки Т-лимфоцитов.

Кластеры дифференциации антигенов

CD3 – поверхностный маркёр, специфичный для всех клеток субпопуляции Т-лимфоцитов. По функциям относится к семейству белков, формирующих комплекс мембранной передачи сигнала, связанный с Т-клеточным рецептором.

CD4 – характерен для хелперных Т-клеток; представлен также на моноцитах, макрофагах, дендритных клетках. Он связывается с молекулами MHC класса II, экспрессированными на антигенпрезентирующих клетках, облегчая распознавание пептидных антигенов.

CD8 – характерен для супрессорных и/или цитотоксических Т-клеток, ЕК-клеток, большей части тимоцитов. Это рецептор Т-клеточной активации, который облегчает распознавание клеточно-связанных антигенов MHC класса I (major histocompatibility complex - главный комплекс гистосовместимости).

CD16 – используется вместе с CD56 преимущественно для идентификации ЕК-клеток. Представлен также на макрофагах, тучных клетках, нейтрофилах, некоторых Т-клетках. Это компонент рецепторов, связанных с IgG, опосредующих фагоцитоз, продукцию цитокинов и антителозависимую клеточную цитотоксичность.

CD19 – присутствует на B-клетках, их предшественниках, фолликулярных дендритных клетках, считается самым ранним маркёром B-клеточной дифференциации. Регулирует развитие, дифференциацию и активацию B-клеток.

CD56 – прототипный маркёр ЕК-клеток. Помимо ЕК-клеток присутствует на эмбриональных, мышечных, нервных, эпителиальных клетках, некоторых активированных Т-клетках. CD56-позитивны такие гематологические опухоли, как ЕК-клеточная или Т-клеточная лимфома, анапластическая крупноклеточная лимфома, плазмоклеточная миелома (плазмоклеточная лейкемия CD56-негативна). Это молекулы адгезии клеточной поверхности, которые облегчают гомофильную адгезию и участвуют в контактном ингибировании роста, ЕК-клеточной цитотоксичности, развитии нервных клеток.

Литература

1. Зурочка А.В., Хайдуков С.В. и др. - Проточная цитометрия в медицине и биологии. - Екатеринбург: РИО УрО РАН, 2013. – 552 с.
2. Клиническая иммунология и аллергология / Ред. Лолор-младший Г., Фишер Т, Д. Адельман Д../: Пер. с англ. - М.: Практика, 2000. - 806 с.
3. Клиническая лабораторная диагностика. Национальное руководство. Том 2./Ред. Долгов В.В., Меньшиков В.В./ – М., ГЭОТАР-Медиа, 2012 – 808 с.
4. Практическое руководство по детским болезням. Том 8 Иммунология детского возраста. /Ред. А.Ю.Щербина, Е.Д.Пашанов/ - Москва: МЕДПРАКТИКА, 2006 - 432 с.
5. Ройт А., Бростофф Д., Дейл Д. Иммунология. - М.: Мир, 2000 — 592 с
6. Ярилин А. А. Иммунология. – М.: ГЭОТАР-Медиа. 2010 - 752 с.
7. Leach М., Drummond М., Doig A. Practical Flow Cytometry in Haematology Diagnosis Hardcover. – WILEY-BLACKWELL, 2013.
8. Tietz Clinical guide to laboratory tests. 4-th ed. Ed. Wu A.N.B. – USA: W.B Sounders Company, 2006 - 1798 p.